شرح شامل لمبادئ تكنولوجيا بكر وأساليب فلوري بكر

أو. مبدأ تقنية PCR

هذا العام ، يدور حول العالم ، ولابد أن الجميع قد سمعوا عن اختبار الحمض النووي. في الكشف عن الحمض النووي للوباء ، تلعب تقنية الفلورسنت الكلور دورًا مركزيًا ، مما يمكن أن يساعد المفتشين على تحديد ما إذا كانوا مصابين بالعدوى بسرعة ودقة.

ما هي تقنية PCR بالضبط ؟

PCR هو اختصار لتفاعل البوليميراز المتسلسل. باختصار ، يتكون PCR من ثلاث خطوات تفاعل أساسية: تمسخ درجات الحرارة العالية-درجة حرارة منخفضة التلدين-تمديد درجة الحرارة المتوسطة:

1. تمسخ الحمض النووي ليصبح أحادي الجديلة

بعد تسخين نموذج الحمض النووي إلى حوالي 95 درجة مئوية لفترة معينة من الزمن ، يتم فصل حبال الحمض النووي المزدوج للقالب إلى حبلا واحد بحيث يمكن ربطه بالتمهيدي والاستعداد للجولة التالية من التفاعل.

2. درجة حرارة منخفضة الصلب

بعد أن يتم تغيير شكل الحمض النووي إلى خيوط مفردة ، يتم خفض درجة الحرارة إلى حوالي 55 درجة مئوية ، ويتم إقران البادئات بالتسلسلات المكملة لخيوط قالب الحمض النووي الفردي.

3. تمديد درجة الحرارة المتوسطة

تحت تأثير إنزيم Taq ، يستخدم قالب الحمض النووي والترابيء المقترنان dNTP كمادة خام للتفاعل والتسلسل المستهدف كقالب ، وفقًا لمبدأ اقتران القاعدة والتكرار شبه المحجوز ، وأخيرًا تجميع سلسلة نسخ شبه محفوظة جديدة مكملة لسلسلة نموذج الحمض النووي.

يضمن. طرق الكشف عن الفلورسنت PCR

في الوقت الحالي ، تستخدم معظم كواشف الكشف المعتمدة من قبل إدارة الدواء الحكومية في الصين طرق الفلورسنت بتقنية PCR للكشف عن من من من من من.

يشير أسلوب الفلورسنت PCR إلى إضافة مجموعات الفلورسنت إلى نظام تفاعل PCR. مع تقدم تضخيم PCR ، تستمر منتجات التفاعل في التراكم ، وتزداد كثافة الإشارة الفلورية أيضًا بشكل تناسبي. الرسم البياني لمنحنى تضخيم الفلورسنت ، الكشف في الوقت الحقيقي لعملية الفلورسنت الكلور.

أو. مبادئ اختيار المواد الاستهلاكية الفلورية PCR

1. المواد

يتكون PCR بشكل عام من مادة PP ، لأن المواد الاستهلاكية PCR/qPCR عادة ما تكون على اتصال مباشر مع الكواشف أو العينات ، في حين أن مادة البولي بروبيلين (PP) هي مادة خاملة بيولوجيًا ، السطح ليس من السهل الالتصاق بالجزيئات الحيوية ، وله مقاومة كيميائية جيدة ودرجة حرارة جيدة. تسامح (يمكن تعقيمه بالسعر من من من من من من الدرجة C ويمكنه أيضًا تحمل تغيرات درجة الحرارة أثناء ركوب الدراجات الحرارية). المواد الاستهلاكية PCR كلها مواد PP.

2. حجم أنبوب/لوحة PCR

كيف نختار أنابيب/ألواح بأحجام مختلفة ؟

الغرض من الاختيار: حدد المنتج المناسب وفقًا للمتطلبات التجريبية المحددة. يمكن أن يلبي حجم أنابيب PCR متطلبات تفاعلات PCR في الغالب. أنابيب PCR مثالية لتجارب PCR/qPCR منخفضة إلى متوسطة الإنتاجية ، مع كون الأنابيب والشرائط المفردة هي التنسيقين الأكثر استخدامًا.

يوفر أنبوب واحد المرونة لتعيين العدد الدقيق لردود الفعل للتشغيل. بدلاً من ذلك ، يمكن اختيار أنبوب مفرد من أجل أحجام التفاعل الأكبر.

وصلات متاحة عادة في شكل 8 أو 12 أنبوب مع منفصلة أو مع قبعات. متوافقة مع ماصات أحادية القناة ومتعددة القنوات لتجارب الإنتاجية المنخفضة والمتوسطة. شرائط بغطاء مفتوحة وإغلاق أنابيب العينات بشكل مستقل لمنع تلوث العينات.

3. سمك الجدار

يؤثر سمك جدار الأنبوب بشكل مباشر على التوصيل الحراري ، ويسمك الجدار الرقيق للغاية يحسن نقل الحرارة ويقلل من وقت الدورة. إن بلاستيك الجدار الرقيق للغاية هو أنحف من الإصدار القياسي ، مما يقلل من الحاجز الحراري ، مما يؤدي إلى استجابة أسرع وأكثر قوة. المواد الاستهلاكية PCR كلها جدران أنبوبية رقيقة جدا.

4. لون

غالبًا ما تتوفر لوحات PCR في مجموعة متنوعة من تنسيقات الألوان المختلفة لتسهيل التمايز البصري وتحديد العينات ، خاصة في التجارب عالية الإنتاجية. بالنسبة لتفاعلات PCR العادية ، من الممكن استخدام أنابيب PCR شفافة أو ملونة ، وأنابيب PCR الشفافة أكثر فائدة لإدارة تصنيف العينات.

على الرغم من أن لون البلاستيك ليس له تأثير على تضخيم الحمض النووي ، يوصى باستخدام مستهلكات PCR بيضاء عالية الجودة لـ qPCR. بما أن qPCR يتطلب الكشف الكمي في الوقت الفعلي لكثافة الإشارة الفلورية ، فإن نقل الإشارة الفلورية الحساسة والدقيقة مطلوب. وقد أظهرت التجارب أنه بالمقارنة مع منتجات PCR التقليدية الشفافة ، يمكن لمنتجات PCR البيضاء أن تعكس إشارة الفلورسنت إلى أقصى حد ، وتقلل من التلوث المتبادل للإشارات الفضائية ، والحصول على نتائج الفلورسنت الكمي في الوقت الحقيقي PCR.

ماركات مختلفة من الأدوات ، بسبب التصميم المختلف لكاشف الفلورسنت ، يرجى الرجوع إلى المواد الموصى بها من قبل الشركة المصنعة. بالنسبة لأداة CFX Bio-Rad أو Roche في الوقت الفعلي ، توصي الشركة المصنعة باستخدام ألواح PCR بيضاء. لأن لوحة PCR إما بيضاء أو شفافة ، ولها مواصفات مختلفة ، فهي مناسبة لأدوات PCR الشائعة في السوق.