طرق شائعة من إليسا السريرية المؤتمتة بالكامل

اعتمادًا على الاختلاف في تحديد المستضدات والأجسام المضادة ، هناك العديد من أوضاع قياس إليسا الأوتوماتيكية ، مثل الطريقة المباشرة ، الطريقة غير المباشرة ، طريقة شطيرة الأجسام المضادة المزدوجة (مباشرة ، غير مباشرة) ، طريقة تثبيط تنافسية (مباشر ، شطيرة ، إلخ) ، طريقة التقاط ، إلخ. في المختبرات الطبية ، تشمل أوضاع قياس إليسا الشائعة طريقة شطيرة الأجسام المضادة المزدوجة ، الطريقة غير المباشرة ، طريقة شطيرة المستضد المزدوج ، طريقة تثبيط التنافسية وطريقة الالتقاط.

في تحديد المستضدات ، الوضع الأكثر استخدامًا لتحديد مستضدات جزيء البروتين هو طريقة ساندويتش الأجسام المضادة المزدوجة. للجزيئات الصغيرة التي تحتوي على حاتم واحد فقط ، يتم استخدام طريقة تثبيط تنافسية ؛ عادة ما يستخدم تحديد الأجسام المضادة طريقة غير مباشرة ، طريقة شطيرة مستضد مزدوجة ، طريقة تثبيط تنافسية وطريقة التقاط.

1. طريقة شطيرة الأجسام المضادة المزدوجة لمحطة عمل إليسا

للبروتينات الجزيئية التي تحتوي على الحواتم المتعددة ،محطة عمل إليسايستخدم طريقة شطيرة الأجسام المضادة المزدوجة لتحديد أنها بسيطة للغاية. مجموعات تجارية موجودة لقياس مستضدات البروتين بشكل أساسي كلها تعتمد وضع القياس هذا.

أول مجموعة إليسا أوتوماتيكية بالكامل للكشف عن الأجسام المضادة المزدوجة للمستضدات جميعها اعتمدت "طريقة الخطوتين". في وقت لاحق ، من أجل تقصير وقت الكشف وتبسيط خطوات العملية ، أدخلت الشركات المصنعة كاشف تدريجيا "خطوة واحدة"طقم اختبار طبي.

في الوقت الحاضر ، في مختبرنا السريري ، تحديد المستضدات الجزيئية مثل HBsAg ، بروتين ألفا فيتو (α-fetoprotein ، αFP) ، مستضد معين للبروستاتا (PSA) ، علامات سلسلة CA ، hCG والهرمونات ، وما إلى ذلك ، تستخدم طريقة الخطوة الواحدة بشكل أساسي. بالمقارنة مع طريقة الخطوتين ، فإن طريقة الخطوة الواحدة سهلة التشغيل ، ولكن لها أوجه قصور متأصلة. إذا لم يتم التعامل معها بشكل جيد ، فإن نتائج المقايسة المناعية لشطيرة الأجسام المضادة المزدوجة ستكون سلبية أو نتائج كمية منخفضة بسبب وجود تأثير الخطاف.

2. اختبار قانون تنافسي لمحطة عمل إليسا

جزيئات صغيرة مثل الديجوكسين ، الثيوفيلين وأدوية وهرمونات أخرى مثل T3 ، T4 ، والتيسترون قد يكون لها حاتم واحد فقط. أو لأن الجزيء صغير جدًا ، بعد الارتباط بجسم مضاد واحد ، لا يمكنه الارتباط بجسم مضاد آخر بسبب العوائق الستيرية ، لذلك لا يمكن استخدام طريقة شطيرة الأجسام المضادة المزدوجة للقياس. يمكن لمحطة عمل إليسا استخدام طريقة تثبيط المنافسة فقط.

في وضع الفحص هذا ، يجب الحصول على مزيج من الجزيئات الصغيرة والإنزيمات. إن تحضير مُقارنة إنزيم جزيء صغير ليس بسيطًا مثل إنزيم الأجسام المضادة المترافق ، كما أن تنقيتها صعبة للغاية. فرق الوزن الجزيئي بين الإنزيم الصغير المرتبط بالجزيء والإنزيم الحر صغير ، ومن الصعب فصله باستخدام طرق المنخل الجزيئي العامة. لذلك ، يحاول بعض الناس إنشاء طريقة إليسا المنافسة على شطيرة الأجسام المضادة المزدوجة لتحديد الجزيئات الصغيرة على أساس توليف جزيئات صغيرة ثنائية أو متعددة. تم تحسين حساسية وخصوصية التصميم.

3. طريقة غير مباشرة لتحديد الأجسام المضادة في محطة عمل إليسا

قياس الأجسام المضادة التي ينتجها الجسم ضد المستضدات الممرضة للأمراض المعدية ، وينطبق الشيء نفسه علىطقم اختبار الأجسام المضادة. قبل أن يكون من الصعب الحصول على مستضدات عالية النقاء ومحددة جيدًا ، أو عندما تكون المستضدات أكثر تعقيدًا ، يتم استخدام الطريقة غير المباشرة بشكل عام.

في الوقت الحاضر ، تعد عناصر الاختبار السريري الشائعة المستخدمة للأجسام المضادة لفيروس التهاب الكبد C (anti-HCV) كلها أساليب غير مباشرة ، ويتم استخدام الطريقة غير المباشرة للكشف عن الأجسام المضادة. بالمعنى الدقيق للكلمة ، يتم قياس فئة IgG فقط من الأجسام المضادة ، ولا تشارك فئات IgM و IgA. يتم تحديد هذا بواسطة الجسم المضاد الثانوي المسمى بالإنزيم. في الوقت الحالي ، تعتمد بعض مجموعات الكشف عن الأجسام المضادة المحددة الطريقة غير المباشرة.

4. طريقة شطيرة مستضد مزدوجة من محطة عمل إليسا

تشمل الأجسام المضادة التي يتم قياسها بواسطة طريقة شطيرة المستضد المزدوج جميع أنواع الأجسام المضادة المحددة ، ولا يتدخل فيها جهاز IgG غير محدد. لذلك ، فإن حساسية وخصوصية طريقة شطيرة المستضد المزدوج للكشف عن الأجسام المضادة أعلى من الطريقة غير المباشرة. في الوقت الحالي ، من أجل تحسين حساسية تحديد الأجسام المضادة ، اعتمدت مجموعة محطة عمل إليسا أساسًا طريقة ساندويتش المضاد المزدوج ، باستثناء أن مضاد HCV أكثر تعقيدًا بسبب مستضاده.

5. قانون المنافسة لمحطة عمل إليسا

تحديد الأجسام المضادة عموما لا يستخدم طريقة المنافسة. عندما يصعب إزالة الشوائب في المستضد أو تكون خصوصية الربط للمستضد غير مستقرة ، يمكن لمحطة عمل إليسا استخدام هذا الوضع لتحديد الأجسام المضادة. المثال الأكثر شيوعًا هو تحديد الجسم المضاد الأساسي لفيروس التهاب الكبد B (HBcAb) والفيروس ب المضاد لالتهاب الكبد الوبائي (HBeAb).