أخبار

اعتمادًا على الاختلاف في تحديد المستضدات والأجسام المضادة ، هناك العديد من أوضاع قياس إليسا التلقائية ، مثل الطريقة المباشرة ، الطريقة غير المباشرة ، طريقة شطيرة الأجسام المضادة المزدوجة (مباشرة ، غير مباشرة) ، طريقة تثبيط تنافسية (مباشرة ، شطيرة ، إلخ) ، طريقة الالتقاط ، إلخ. في المختبرات السريرية ، تشمل أوضاع قياس إليسا الشائعة طريقة شطيرة الأجسام المضادة المزدوجة ، الطريقة غير المباشرة ، طريقة شطيرة المستضد المزدوج ، طريقة تثبيط التنافسية وطريقة الالتقاط.

في تحديد المستضدات ، الوضع الأكثر استخدامًا لتحديد مستضدات جزيء البروتين هو طريقة ساندويتش الأجسام المضادة المزدوجة. للجزيئات الصغيرة التي تحتوي على حاتم واحد فقط ، يتم استخدام طريقة تثبيط تنافسية ؛ عادة ما يستخدم تحديد الأجسام المضادة طريقة غير مباشرة ، طريقة شطيرة مستضد مزدوجة ، طريقة تثبيط تنافسية وطريقة التقاط.

1. طريقة شطيرة الأجسام المضادة المزدوجة لمحطة عمل إليسا

For macromolecular proteins containing multiple epitopes, the محطة عمل إليسا uses the double antibody sandwich method to determine it is quite simple. The existing commercial kits for measuring protein antigens basically all adopt this measuring mode.

The first full-automatic ELISA kits for double-antibody sandwich detection of antigens all adopted the "two-step method." Later, in order to shorten the detection time and simplify the operation steps, reagent manufacturers gradually introduced the "one-step" طقم اختبار طبي.

في الوقت الحالي ، في مختبرنا السريري ، تحديد المستضدات الجزيئية مثل HBsAg ، بروتين ألفا فيتوبروتين (α-fetoprotein ، αFP) ، مستضد محدد للبروستاتا (PSA) ، علامات سلسلة CA ، hCG والهرمونات ، وما إلى ذلك ، تستخدم أساسًا طريقة الخطوة الواحدة. بالمقارنة مع طريقة الخطوتين ، فإن طريقة الخطوة الواحدة سهلة التشغيل ، ولكن لها أوجه قصور متأصلة. إذا لم يتم التعامل معها بشكل جيد ، فإن نتائج الفحص المناعي لساندويتش الضد المزدوج ستكون سلبية خاطئة أو نتائج كمية منخفضة بسبب وجود تأثير الخطاف.

2. اختبار قانون تنافسي لمحطة عمل إليسا

Small molecule haptens such as digoxin, theophylline and other drugs and hormones such as T3, T4, and testosterone may have only one epitope. Or because the molecule is too small, after binding to one antibody, it cannot bind to another antibody due to steric hindrance, so the double-antibody sandwich method cannot be used for measurement. The محطة عمل إليسا can only use the competitive inhibition method.

في وضع الفحص هذا ، يجب الحصول على مزيج من الجزيئات الصغيرة والإنزيمات. إن تحضير مُقارنة إنزيم جزيء صغير ليس بسيطًا مثل إنزيم الأجسام المضادة المترافق ، كما أن تنقيه صعب للغاية. فرق الوزن الجزيئي بين الإنزيم الصغير المقيد بالجزيء والإنزيم الحر صغير ، ومن الصعب فصله باستخدام طرق المنخل الجزيئي العامة. لذلك ، يحاول بعض الناس إنشاء طريقة إليسا المنافسة على شطيرة الأجسام المضادة المزدوجة لتحديد الجزيئات الصغيرة على أساس توليف جزيئات صغيرة ثنائية أو متعددة. تم تحسين حساسية وخصوصية التصميم.

3. طريقة غير مباشرة لتحديد الأجسام المضادة في محطة عمل إليسا

Measure the antibodies produced by the body against pathogen antigens of infectious diseases, and the same is true for the طقم اختبار الأجسام المضادة. قبل أن يكون من الصعب الحصول على مستضدات عالية النقاء ومحددة جيدًا ، أو عندما تكون المستضدات أكثر تعقيدًا ، يتم استخدام الطريقة غير المباشرة بشكل عام.

في الوقت الحاضر ، تعد عناصر الاختبار السريري الشائعة المستخدمة للأجسام المضادة لفيروس التهاب الكبد C (anti-HCV) كلها أساليب غير مباشرة ، ويتم استخدام الطريقة غير المباشرة للكشف عن الأجسام المضادة. بالمعنى الدقيق للكلمة ، يتم قياس فئة IgG فقط من الأجسام المضادة ، ولا تشارك فئات IgM و IgA. يتم تحديد هذا بواسطة الجسم المضاد الثانوي المسمى بالإنزيم. في الوقت الحالي ، تعتمد بعض مجموعات الكشف عن الأجسام المضادة بالأسلوب غير المباشر.

4. طريقة شطيرة مستضد مزدوجة لمحطة عمل إليسا

The antibodies measured by the double antigen sandwich method include all types of specific antibodies, and are not interfered by non-specific IgG. Therefore, the sensitivity and specificity of the double antigen sandwich method to detect antibodies are higher than the indirect method. At present, in order to improve the sensitivity of antibody determination, the kit of the محطة عمل إليسا has basically adopted the double-antigen sandwich method, except that anti-HCV is more complicated due to its antigen.

5. قانون المنافسة لمحطة عمل إليسا

The determination of antibodies generally does not use a competition method. When the impurities in the antigen are difficult to remove or the binding specificity of the antigen is unstable, the محطة عمل إليسا can use this mode to determine antibodies. The most typical example is the determination of hepatitis B virus core antibody (HBcAb) and hepatitis B virus e antibody (HBeAb).