أخبار

1. في الوقت الحقيقي بخور الكمية

في عام 1996 ، تم تقديم تفاعل سلسلة البوليميراز الكمي في الوقت الحقيقي (qipr في الوقت الحقيقي) لأول مرة من قبل النظم البيولوجية المطبقة في الولايات المتحدة. يشير ما يسمى qcr في الوقت الفعلي إلى إضافة مجموعات الفلورسنت إلى تفاعل بكر لمراقبة إشارة الفلورسنت باستمرار. يمكن استخدام ترتيب المظهر وتغيير قوة الإشارة لتحليل الكمية الأولية للجين المستهدف في الوقت الفعلي. اختراع هذه التكنولوجيا يحقق قفزة من النوعية إلى الكمية فكر.

2. المواد الكيميائية المستخدمة في الفلورسنت بزر

في الوقت الحالي ، ينقسم qPCR في الوقت الفعلي إلى فئتين: أصباغ الفلورسنت وتحقيقات الفلورسنت وفقًا للمواد الكيميائية الفلورية المختلفة المستخدمة.

3. الأصباغ المستخدمة في مضان بكور

وتسمى الأصباغ الفلورية أيضًا أصباغ ربط الحمض النووي. جزيء الصبغة الرئيسي المستخدم حاليًا هو SYBR Green I. SYBR Green يمكنني ربطه بشكل خاص بأخدود بسيط من DNA مزدوج الشق. SYBR Green مجاني لا يوجد لدي أي إشارة فلورسنت تقريبًا ، ولكن يرتبط بحمض الحمض النووي المزدوج. بعد ذلك ، يمكن زيادة إشارة الفلورسنت مئات المرات. مع زيادة منتج PCR ، تزداد أيضًا كمية الربط لمنتج PCR وصبغته ، وتمثل كثافة الإشارة الفلورية عدد جزيئات DNA مزدوجة الضبط.

تتمثل مزايا الأصباغ الفلورية في أنها سهلة الاستخدام ، ويمكن دمجها مع أي منتج من منتجات الـ PCR ، وغير مكلفة.

بشكل عام ، تعد طريقة SYBR Green I واحدة من أكثر تجارب qpr في الوقت الفعلي أساسية وشائعة الاستخدام.

4. تحقيقات ل بكار مضان

The most commonly used fluorescent probes in Real-time qPCR are TaqMan probes. The basic principle is to design and synthesize a probe that can specifically hybridize to the target gene. The 5' end of the probe is labeled with a fluorophore, and the 3' end is labeled with a quencher group.

في الظروف العادية ، تكون المسافة المكانية بين المجموعتين قريبة جدًا ، ولا يمكن للجين الفلوري أن يتلألأ بسبب التبريد. أثناء تضخيم البكر ، يرتبط التمهيدي والمسبار بالنموذج في نفس الوقت ، ويقع موضع الربط للمسبار بين بادئات المنبع والمتدفق.

When the amplification extends to the position where the probe binds, the Taq enzyme uses the 5' exonuclease activity to cleave the fluorescent molecule attached to the 5' end of the probe from the probe, causing it to fluoresce. The number of detected fluorescent molecules is proportional to the number of PCR products, therefore, the number of initial DNA templates can be calculated according to the fluorescence intensity in the PCR reaction system.

تقنية مسبار التقمان تحل مشكلة الجمع بين الأصباغ الفلورية والتضخيم غير المحدد. بعد التفاعل ، ليست هناك حاجة للكشف عن منحنى الذوبان ، مما يقلل من وقت الاختبار.

تتمثل مزايا تقنية مسبار التقمان في الخلفية الفلورية المنخفضة ، والحساسية العالية ، واستقرار التهجين العالي ، ودقة الطيف الفلورية الجيدة ، وخصوصية عالية.

نظرًا للخصوصية العالية لتحقيقات التقمان ، يمكن استخدامها للتمييز بين الأليلي ، خاصة بالنسبة لأشكال تعدد المورثات البشرية ولتمييز وقياس السلالات القائمة على SNP.